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水質(zhì)及生活飲用水中糞大腸菌群的測定多管發(fā)酵法解析
為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法》和《中華人民共和國水污染防治法》，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，規(guī)范水中糞大腸菌群的測定方法，制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中糞大腸菌群的多管發(fā)酵法。本標(biāo)準(zhǔn)是對《水質(zhì) 糞大腸菌群的測定 多管發(fā)酵法和濾膜法（試行）》（HJ/T 347-2007）多管發(fā)酵法部分的修訂。
多管發(fā)酵法是一種用于檢測水樣中糞大腸菌群數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)化微生物學(xué)方法，其核心原理是利用大腸菌群能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的特性，通過分階段培養(yǎng)和觀察來實現(xiàn)定性和定量分析。該方法操作流程嚴(yán)謹(jǐn)，是水質(zhì)監(jiān)測中的重要手段。
根據(jù)現(xiàn)行國家生態(tài)環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)，?《水質(zhì) 糞大腸菌群的測定 多管發(fā)酵法》（HJ 347.2-2018）? 是當(dāng)前適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水的方法，該標(biāo)準(zhǔn)于2019年6月1日起實施，替代了早期的試行標(biāo)準(zhǔn)?。
多管發(fā)酵法的操作流程主要分為以下三個相互銜接的部分：
?初發(fā)酵試驗?：將不同稀釋度的水樣接種至乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，在?37℃±0.5℃?條件下培養(yǎng)?24±2小時?。若培養(yǎng)管出現(xiàn)?產(chǎn)酸?（培養(yǎng)液由紫色變?yōu)辄S色）和?產(chǎn)氣?（杜氏小管內(nèi)有氣體積聚），則判定為初發(fā)酵陽性?。
?復(fù)發(fā)酵試驗?：將初發(fā)酵陽性的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至?EC培養(yǎng)液?中，在?44.5℃±0.5℃?的恒溫水浴中繼續(xù)培養(yǎng)?24±2小時?。若再次產(chǎn)氣，則確認(rèn)為糞大腸菌群陽性，此步驟通過提高溫度特異性地篩選出糞便來源的大腸菌群。
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平板分離與確認(rèn)?（可選但常用）：將復(fù)發(fā)酵陽性的培養(yǎng)物接種于伊紅美藍(lán)（EMB）瓊脂平板上，于44.5℃培養(yǎng)18–24小時。觀察是否形成具有?深紫黑色金屬光澤?的典型菌落，并通過革蘭氏染色和顯微鏡檢查進(jìn)行最終確認(rèn)?。
該方法通過統(tǒng)計不同稀釋度下陽性管的數(shù)量，查?最可能數(shù)（MPN）表?，最終計算出每100mL或每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)量??。
需注意水利行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《水質(zhì) 糞大腸菌群的測定 多管發(fā)酵法》（SL 355-2006）曾長期使用，其操作流程與HJ 347.2-2018基本一致，但當(dāng)前環(huán)境監(jiān)測領(lǐng)域已統(tǒng)一采用發(fā)布的HJ標(biāo)準(zhǔn)?。
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